Palatab

Mysz fenotypowym UCSD University …

Mysz fenotypowym UCSD University ...

Jeżeli tkanki usuwa się z organizmu, proces autolizy przebiega szybko. Zatem ważne jest, aby FIX przetwarzać i wosk embed tkanki, ani nie zamrażać . tak szybko, jak to możliwe, po usunięciu z organizmu, w celu ZACHOWAĆ Morfologia tkanki do badania histopatologicznego.

Oto kilka dobrych linków, które można sprawdzić, aby uzyskać wskazówki dotyczące sekcji zwłok myszy:

Ta strona jest dobrym laboratorium referencyjne o pomoc w ocenie nerwowo-mięśniowe – obejmuje to prawidłowo zorientowane i przetwarzane mięśni i nerwów. Zadzwoń do nich o pomoc w planowaniu eksperymentów z udziałem mięśni i nerwów.

Ten ostatni jest dobrym miejscu z diagramami, aby pomóc w przycinanie narządy przed lub po utrwaleniu.

Podsumowanie optymalnej obsługi tkankach myszy:

  1. Tkanki mogą być zamrożone w sposób opisany w "Zamrażanie protokół",
  2. Jeżeli tkanki mają być ustalone, przetwarzane, osadzone i przekroju następujące procedury zaleca się:
  1. MÓZG: Zwierzę perfuzji pierwszym PBS (roztwór soli buforowany fosforanem), po czym za pomocą 10% buforowanej formalinie, przed otwarciem czaszki usunąć mózg do badania po przetworzeniu, osadzanie i cięcia. Perfuzji najlepiej do badania mózgu, aby uniknąć artefaktów wprowadzanych podczas wyjmowania z czaszki.
  2. Skórze, trzustka, śledziona, grasica są spłaszczone między gąbkami w oznakowanych kaset i stałe, do przetwarzania, osadzanie i cięcia. Po przetworzeniu, skóra jest starannie osadzone na krawędzi.
  3. Nerek, wątroby, serca, nerek i przekroić na pół umieścić płaską powierzchnię w dół, z kwadratową segmentu wątroby, i dwie połówki serca, w oznakowanych kaset, i ustalić, do przetwarzania, zatapiania i cięcia.
  4. Płucami: Jeśli zwierzę nie jest perfuzji, płuca są napełnione utrwalacz; Każdy płat oddziela się i płasko między gąbkami w oznakowanych kaset i stałe, do przetwarzania, zatapiania i cięcia.
  5. Jajniki, nadnercza i węzły chłonne są umieszczone w oznakowanych kaset i stałe, do przetwarzania, zatapiania i cięcia. Jądra powinny być zamocowane w roztworze Bouina przez okres co najmniej 6 godzin przed przeniesieniem do 70% alkoholu w oznakowanych kaset, do przetwarzania, zatapiania i cięcia. Te małe narządy są przetwarzane za pomocą “Krótki” Protokół do generowania dobrych odcinków
  6. GUT: żołądka i przełyku powinno być otwarte, aby umożliwić utrwalający przeniknąć a każde pół płasko w oznakowanym kasety. Jelito cienkie powinny być pobrane próbki z plamami Peyera zawartych, z różnych miejsc. Otwory na siebie końców rur wybranych pozwoli utrwalacz do penetracji. Jednak okrężnicy pewno musi być otwarty i gorąco, jak opisano poniżej, przed ustaleniem i przetwarzania, zatapiania i cięcia.
  7. Kości muszą być oddzielone od zwapnienia – patrz poniżej. Jeśli immunostains są potrzebne na szpik kostny, kości powinny odwapniać w EDTA, patrz poniżej.
  8. Próbki nowotworowe powinny być krojone cienki, tak że utrwalacz może wykonywać swoje zadania dobrze, a umieszczone w oznakowanych kaset i stałe, do przetwarzania, zatapiania i cięcia.
  9. Jeśli są planowane IMMUNOSTAINS, nie naprawić dłużej niż 24 godzin w 10% buforowanej formalinie, przed przystąpieniem do zanurzyć się w 70% alkoholu, w oznakowanych kaset i stałe, do przetwarzania, zatapiania i cięcia.
  10. Jeśli są planowane immunostains, upewnij się, że kontrole pozytywne i negatywne są przetwarzane w podobny sposób. Jeśli komórki hodowli tkankowej są kontrole pozytywne i negatywne, plan dorosnąć 100 milionów komórek, zmyć mediów, i ponownie zawiesić każdy osad komórek w 10% buforowanej formalinie przez 24 godziny. Następnie planuje Wirowanie pastylce każdego zestawu komórek i osadzić w 1% żelu agarozowym w wodzie, postawienie zestalony agarozowym z osadu komórek między gąbki oznakowanego kasetami, dla przetworzenia, osadzanie i cięcia. Dwa lub więcej zestawów komórek może być w przekroju na szkiełka do stosowania jako negatywne i pozytywne kontrole w immunohistochemicznie (patrz protokoły IHC więcej szczegółów).
  11. Tkanki tłuszczowej: sekcje mrożone są trudne. Najlepszym morfologia uzyskuje się, gdy tkanka tłuszczowa jest umieszczony pomiędzy tkanki gąbki kasetę i umieszczona w odpowiednio oznakowanych kaset i utrwalano w 10% buforowanej formalinie przez 24 godzin, po czym przeniesiono je do 70% alkoholu do przetwarzania, osadzanie i skrawki parafinowe.

TERAZ do wykazania różnych technik, które należy stosować, jeśli ktoś pracuje z tkanek mrożonych lub ze stałym, przetwarzane tkanek (patrz następny rozdział):

Zamrożone tkanki, które są właściwie zamrożone z KTZ compund w suchym lodem / izopentanu zawiesiny (patrz protokół) są krio-przekroju w KRIOSTAT –podobny do pokazanego na zdjęciu.

Zamrożone wycinki są najlepiej wykorzystywane do badań immunohistochemicznych, ale morfologiczny szczegół nie jest dobrze zachowane reguły

Obudowa utrzymywana jest chłodzony tak, zamrożone wycinki (co 5 mikronów grubości zapisu do 20 mikrometrów grubości) może być cięte przy temperaturach, które zmieniają się od minus 15 stopni (narządów litych, takich jak śledziona, wątroba, nerki, serca) lub minus 30 stopni (na delikatne lub trudne do narządów sekcji lub tkanki, takie jak mózg lub tkanki tłuszczowej).

Tkanki, które są zamrożone na histopatologicznego użytku, Muszą zostać zamrożone za pomocą specjalnych protokołów, opisane w "PROTOKOŁY" Sekcja.

październik (Optymalna temperatura cięcia) Związek, VWR Cat nr: 25608-930) służy do otoczyć i CRYOPROTECT świeżej tkanki, (upewnij się, że soki tkanki zostały całkowicie wymazane z dala od całego tkanek o być mrożone), która jest umieszczona w forma winylu bardziej OCT, a następnie ten zanurza się w kąpieli suchy lód i 2 butan metylu (izopentan Fisher nr kat. 03551-4) UWAGA: Należy pamiętać, że jeden Nie wolno używać ETHANOLwith suchy lód — Etanol NIE zamrażać. ).

Oil Red O plamy na tkanki tłuszczowej mają być przeprowadzone na zamrożonego materiału. Pamiętaj, że jest to technicznie bardzo trudne do cięcia zamrożonych skrawków tkanki tłuszczowej, jednak trzeba przecierpieć, że w tym celu plamy oleju Red O

Jeśli chcesz, aby wykryć obecność etykiety GFP w tkankach, MUSISZ perfuzji naprawić zwierzęcia po uśmierceniu, przed zamrożeniem narządów.

Po październiku staje się biały, zamrożony blok tkanki pękło z formy, umieszczone w oznakowanych workach plastikowych, w pudełku na minus osiemdziesiąt zamrażarce, aż zajdzie taka potrzeba dla mrożonych sekcjach. Wielu badaczy, dodatkowo miejsce cienkie plasterki świeżych PARAFORMALDEHYD stałej tkanki w 30% sacharozy, w celu cryoprotect tkanek, przed zamrożeniem w OCT. Z naszego doświadczenia wynika, krioprotekcji w sacharozy nie jest koniecznością dla wielu narządów Zbadaliśmy

JEŚLI niezamroŜone dobrze, będzie rozbicia tkanki podczas cięcia, a pokaże artefaktów zamarznąć i dlatego nie może być wykorzystywany do testów barwienia immunologicznego. Pamiętaj —- zamrożonych tkanek są krio-pocięto w kriostacie. i MROŻONY sekcje, przy 5 mikronów lub 10 mikronów lub 20 mikronów, są zamontowane odwilży, na szkiełkach powlekanych, do stosowania immunohistochemiczną Testy, przy użyciu różnych markerów.

Znacznie lepiej szczegółowo morfologiczne uzyskano podczas badania standardowo ustalone, zrealizowane, barwione skrawki parafinowe. Najlepiej jest do oznaczania Kasety samodzielnie, korzystając z nieusuwalny znacznik (nie Sharpie, którego atrament jest rozpuszczalny w rozpuszczalnikach, które są wykorzystywane do przetwarzania tkanek w parafinie).

Jest to również niezwykle ważne, aby porozumiewać się z histotechnologist kiedy dostarczyć próbkę tak, że oboje mogą określić prawidłową orientację tkanek, dzięki czemu otrzymasz prawidłowo zorientowana, osadzony, skrawki i barwiono slajdy dotyczące przeglądu i sfotografować. Pamiętać, utrwalacze wziąć loooooooong czasu infiltracji tkanki, więc cieńsze plastry, które są umieszczone na znakowanym kasety lepiej stałe będą, a tym samym doprowadzić do lepszego szczegółowo morfologicznej na zabarwionych sekcji.

Jednakże, jeśli istnieje plan użytkowania środków skrawków tkanek Immunohistochemicznego testach upewnij się, porozumiewać się z histotechnologist z wyprzedzeniem, a nie pamięta —- naprawić dłużej niż 24 godzin w paraformaldehydzie lub formalinie. Przenieść do 70% alkoholu oraz się do laboratorium histologicznej w celu natychmiastowego przetwarzania, aby można było łatwo wykrywać niezdenaturowanych epitopów.

Stanowisku góry mikrotom jest używany do tych skrawkach parafinowych, jak pokazano na zdjęciu.

W celu uzyskania najlepszego szczegół morfologiczną stałych części, jest BARDZO WAŻNE że tkanka jest świeże Cienkie plasterki, zanim zostaną wprowadzone do roztworu utrwalacza wyboru. tak że utrwalacz może wykonywać swoje zadania prawidłowo.

Fix cienkie plasterki kaset tkanek oznaczony w 10 tomach utrwalaczem przez co najmniej 24 godzin i przenieść do 70% alkoholu do przetwórstwa na parafinie.

Cienkie plastry tkanki są następnie umieszczane FLAT w kasetach plastikowych (Fisher Catalog # 15-182-500E) oznakowana # 2 ołówkiem lub długopisy Secureline II. – Fisher nr kat 1490530. NIE używaj Sharpies lub markerów laboratoryjnych. i zanurzenie w utrwalaczu, która jest co najmniej 10 razy większa od objętości tkanki, która ma być ustalona. Kasety odbędzie tkanek w utrwalaczu przez okres krótszy niż 24 godzin, podczas gdy powinny być przeniesione do 70% alkoholu, dopóki nie zostaną przetworzone, zatopiono w parafinie WAX ​​i pocięto na 3-5 mikronów cienkie plasterki, na powlekany szkiełek, stosując mikrotomu w temperaturze pokojowej, do barwienia i analizy morfologicznej szczegółowo.

Bloczkach parafinowych tkanki mogą być przechowywane w temperaturze pokojowej w ciągu lat i stanowią ważną archiwum w analizach wstecznej. Skrawki parafinowe mogą być stosowane w testach immunohistochemicznych, ale niektóre przeciwciała wymagają Unmasking i / lub amplifikacji przed epitopów w skrawków parafinowych są wykrywalne.

Badanie MOUSE zarodków przy użyciu metod histologicznych:

Większość zarodków można zamrażać w blokach OCT jak opisano powyżej, a skrawki w kierunku strzałkowym, o H&Es (hematoksyliną i eozyną plamy, patrz "protokoły") Do oglądania morfologiczne zabytków. możliwe są porównania typu i zmutowanych zarodkach dzikich jeśli wielu sekcje są postrzegane. Alternatywnie, skrawki wieńcowe, z koroną na zadzie, będzie również wykazać nieprawidłowości. Te zamrożone części mogą być następnie wykorzystane w teście barwienia immunologicznego.

Skrawki parafinowe zapewnić dobrą morfologię, co jest naprawdę ważne, aby naprawić większe zarodki naprawdę dobrze. Może to być konieczne, aby otworzyć brzuch mały, aby umożliwić utrwalający do penetracji.

Mocowanie w roztworze Bouina (patrz niżej) umożliwia szybkie mocowanie i przetwarzania. Jednakże, nie pozwól im usiąść w Bouina zbyt długo inaczej tkanka twardnieje i staje się trudne do przetwarzania i punkt.

Utrwalenie, orientowania i przetwarzania zarodków myszy:

Mocowanie: (lab P.Mellon UCSD) Użyj świeżo wykonaną mieszaninę 6: 3: 1 z
—Absolutnego alkoholu: 37% formaldehydu (Fisher F79-4): Glaclal Kwas octowy
To’s świeże każdym razem.
Użyć 10 ml dla małych zarodków i 15 ml dla większych zarodków
Umieścić w wirówce przez noc w temperaturze 4 ° C.
Następnego dnia, gdy próbki nie są białe, niech naprawić ponownie w świeżym utrwalaczu
przez kolejne 24 godzin.
Następnego dnia, przemyć 70% alkoholu, aż zapach kwasu octowego nie ma.
I wtedy.

Osadzanie i orientacji w Agarose:
Dodać 1% agaroza jest wykonany w wodzie
Umieścić próbkę w formie — formy biopsji (tkanka -TEK # 4565,
jednorazowe winylu formy wzory 10 mm x10 mm x 5 mm)
Palce gorącą agarozę na próbki i bardzo szybko zorientować
Próbka pod mikroskopem
Agaroza umocni szybka
Wyskoczy mały kwadrat utworzony
miejsce w kasecie z tworzywa sztucznego osadzanie Fisher cat # 15-197-700E
odpowiednio oznakowane
albo # 2 miękkie grafitowy ołówek
lub za pomocą rozpuszczalnika organicznego Secureline odporne-pen
(Fisher nr kat 450-20-FSC)
Spadek do 70% alkoholu
i dostać przetwarzane i osadzony w sekcjach parafinowych

TISSUE wyhodowanej kultury komórek, jako kontrole do eksperymentów immunohistologii:

MROŻONY "TKANKA" KONTROLA. Komórki hodowli tkankowej (10-8 uprawiane lub 100 milionów komórek będzie dobrą wielkość granulki) należy wirowano w pastylce, przemyto z nośnika przędziono do osadu i używany jako blok "tkanka" być Zamrożone w KTZ jakby zamrożenie kawałek tkanki.

Zaplanuj, aby zapewnić 100 milionów komórek, które nie wyrażają białka będącego przedmiotem zainteresowania (kontrola negatywna), a także w celu zapewnienia 100 milionów komórek, które wyrażają białka będącego przedmiotem zainteresowania (kontrola pozytywna).

NAPRAWIONY "TKANKA" KONTROLA. Osad komórek może być ponownie zawieszono w świeżo wykonane 4% paraformaldehyd i pozostawiono do ustalenia przez okres krótszy niż 6-24 godzin, obrócił się do osadzenia, ociera na papierze obiektywu, który jest złożony i zamknięty w ShurMark lub ołówkiem oznaczone kaset i przekazany do przetworzenia w bloczkach parafinowych.

Ponownie planuje dostarczyć 100 milionów komórek, które nie wyrażają białka będącego przedmiotem zainteresowania (kontrola negatywna), a także w celu zapewnienia 100 milionów komórek, które wyrażają białka będącego przedmiotem zainteresowania (kontrola pozytywna).

Fragmenty tych osadów komórek, są niezbędnym sterowania do testów immunologicznych na tkankach

Różne utrwalacze są wykorzystywane do różnych celów.

Fix Cienkie plastry tkanki w 10-krotnej objętości utrwalacza, przez co najmniej 24 godzin. Zapoznaj się z kasety z załączonym tkanek w utrwalaczu, do laboratorium Histologia (Niech wiedzą z wyprzedzeniem), dzięki czemu tkanki mogą być przetwarzane natychmiast, a wbudowane w bloczkach parafinowych, na parafinie skrawków.

1. 10% buforowanej formalinie Jest to najbardziej powszechnie stosowanym środkiem utrwalającym (Fisher Catalog # SF93-4). Należy jednak pamiętać, że utrwalacz przenika jedynie do tkanki bardzo powoli (? 1 mm na godzinę?) I w ten sposób, tkanka MUSI plasterki wystarczająco cienkie, aby możliwe było zastosowanie Fixative wykonywać swoje zadania prawidłowo.

2. Świeżo wykonane 4% paraformaldehyd, również rozwiązuje dobrze i jest stosowany powszechnie, do mocowania perfuzji, co czyni dobre preparaty morfologiczne.

utrwalacz 3. Bouin rozwiązuje szybko, i jest szczególnie przydatna przy ustalaniu zarodków, które zostały otwarte nieco umożliwienie utrwalacz do infiltracji. Jednak w środku utrwalającym Bouin, ponieważ rozwiązuje tak dobrze, należy usunąć z kontaktu z tkanką po około sześciu godzinach utrwalania, a tkanka należy przepłukać w 70% alkoholu, kontynuując zmienić alkoholu, aż żółty kolor nie jest dostrzegalna ,

Jeżeli tkanki mogą ustalić w roztworze Bouina zbyt długo, staną się twarde i kruche i trudne do sekcji, w wyniku źle przygotowanych sekcjach

4. cynku zawierające utrwalacze stosuje się w celu zwiększenia immunohistochemiczne próby.

5. Istnieją inne utrwalacze w użyciu, a informacje o nich są dostępne

WYKRYWANIE INCOPORATED GFP (zielone fluorescencyjne białka) w skrawkach tkankowych:

Doświadczenie w laboratorium zostało, że GFP jest bardzo dobrze rozpuszczalny, nawet w przypadku wody kondensacyjnej, która tworzy, gdy próbują zrobić zamrożonych skrawków do szkiełek chyba że jest bardzo obfite.

Dlatego najlepiej jest perfuzji naprawić zwierzę, przed usunięciem narządów zamrozić mrożonych skrawków i badania dla fluorescencji GFP.

Jeśli już zamrożone tkanki myszy do oceny GFP założycielskich, które są nieprzytwierdzonego należy zaplanować, aby wyodrębnić i test na obecność fluorescencji GFP, za pomocą fluorometr UV.

Zobacz GFP Protokół aby uzyskać więcej informacji

SZCZEGÓŁOWE ZALECENIA podczas przetwarzania poszczególnych narządów w celu uzyskania NAJLEPSZE sekcje dla histopatologiczne egzaminu:

MÓZG Morfologia Mózg jest najlepiej zbadane perfuzji, stałych próbek. Nie zapomnij usunąć przysadki, z siodełka tureckiego, po usunięciu mózgu. Przysadka jest mały i trzeba szczególną uwagę, należy pamiętać, aby naradzić się z personelem histologii na ten temat.

Powtarzać: Zaleca się mocowanie z perfuzji całego zwierzęcia odbywa się na najlepszej morfologii i uniknąć arterfacts zamrażać. Aby optymalnie zbadać mózg, plan perfuzji zwierzęcia z utrwalaczem, najpierw z PBS, aby wyczerpać wszystkie krwi, a następnie perfuzji ze świeżo 4% paraformaldehydzie, aby naprawić wszystkie narządy. Jeżeli stałe tkanki mają być zamrożone w testach immunohistologiczne, po utrwaleniu, muszą być zanurzone w 30% sacharozy w temperaturze 4 stopni, aż do zlewu, aby zapobiec zamarzaniu i cryoprotect artefakt i utratę architektury tkanki.

Perfuzji odbywa się za pomocą pompy perfuzyjnej, przez lewą komorę serca, najpierw za pomocą soli fizjologicznej buforowanej fosforanami, a następnie świeżo przygotowanego 4% paraformaldehydu. Za pomocą igły motyl, aby przejść do lewej komory. Za pomocą nożyczek Nick otworzyć prawego przedsionka, tak, że krew wypływa jako obiegowa zostaje zastąpiony.

Jeśli się powiedzie perfuzji, wątroba wola sparzyć jak krew otrzymuje, a następnie nerki. Następnie obserwuje się roztwór buforowy otrzymuje utrwalaczem, który opływa cyrkulacji ciała jeszcze przez 5-10 minut.

przekroje poprzeczne zapewniają widok na cały mózg, z płatów węchowych, do móżdżku, zwłaszcza jeśli różne sekcje krok i wykonane i barwione do oglądania.

przekrojów wieńcowych, jeśli została sporządzona w określonych miejscach, jak pokazano na rysunku, pozwalają podobnych obszarach należy zbadać, tak że może być porównania między kontroli miotu i od zmutowanych zwierząt. Zaleca się, aby wieńcowe odcinki całego mózgu zostać zbadane w celu podnieść małych nieprawidłowości. Badanie za pomocą specjalnych plam i immunohistochemicznych przyczyni się wnikliwie Nieprawidłowości lepiej.

Spójrz na stronie www.mbl.org aby uzyskać więcej informacji.

przekroje strzałkowe są dla łatwiejszego oglądania każdej połowy mózgu, które można teraz oglądać z ogonowej rostralny aspektów, w celu wykrycia oczywistych nieprawidłowości.

Fragmenty mózgu mogą być następnie barwiono przy użyciu różnych plam specjalne dostępne, takie jak LFB (Luxol Fast Blue, która podkreśla mielinowej) etc.

Testy immunohistochemiczne, które pomogą w analizie obejmują anty GFAP (gfap), która wyznacza astrocyty; przeciw MBP (zasadowego białka mieliny), która wyznacza mieliny; anty CD68, co oznacza makrofagów (mikrogleju) etc.

PŁUC morfologię najlepiej zbadane po perfuzji utrwalaczem przez tchawicę, aby napompować wszystkie listki.

Gdyby Zamrożone wycinki są potrzebne, to jest naprawdę ważne, aby napompować płuca w mieszaninie 1: 1 OCT / PBS przed zamrożeniem w zawiesinie w suchym butan lód / 2-metyl. W przeciwnym razie jest to bardzo trudne do uzyskania dobrych mrożonych sekcje, próbując wyciąć tkankę zwinięty, a więc dokładna analiza morfologiczna nie jest możliwe

W badaniach inhalacyjnych, a zwłaszcza w badaniach do oceny przerzutami Zdolność różnych nowotworów, bardzo ważne jest, aby napompować płuca z utrwalaczem. WSZYSTKIE Płaty powinny być oddzielone od siebie, tak, że będą badane odcinki każda, z sekcjami STEP, w celu wykrycia drobnych uszkodzeń.

Aby upewnić się, że otrzymasz slajdy, które zawierają określonego nieprawidłowości, które uwidoczniono w trakcie sekcji zwłok, upewnij się, rozmawiać z histotechnologist po przesłaniu próbki, tak, że zostaną podjęte starania w celu osadzenia obszar zainteresowania, takie, że będzie od razu widoczne na poplamionym slajdu. Obejmują część zdrowej tkanki, która otacza nieprawidłowy obszar, tak aby interpretacja barwionego slajd będzie dokładne.

Serce Należy odcinania wypływki być badane oddzielnie, tak że możliwe będzie wyświetlanie wszystkich płatów płuc, jak pokazano.

Serce może być podzielony na dwie połowy, i zamocowany w kasecie razem z częścią z wątroby połowa nerki i z gruczołów ślinowych – wszystkie mogą być stałe i przeprowadza się w jednym bloku do osadzania. Alternatywnie, główka może być osadzona oddzielnie, w określony sposób, tak, że zawory mogą być oglądane w optymalny lub wbudowane w wierzchołka pierwszej, tak że obie sekcje ujawni komór w celu oceny grubości itd.

Zamrożonych skrawków śledziony są dobre dla KONTROLA immunohistochemia markerów układu krwiotwórczego. W tym celu, całej śledziony osadzony płaski. Na dnie formy winylowych, w październiku. Przed zanurzeniem formy winylu Do lodowatej zawiesiny suchego lodu i 2 butan metylu.

Dla przekrojów parafina, śledziona jest zamknięty pomiędzy dwie gąbki, dzięki czemu będzie on leżeć płasko w kasecie, zanim zostanie on naprawiony. Procedura ta zapewnia dobre, płaskie skrawki parafinowe, bez zmarszczek.

Jeżeli istnieją oczywiste guzki w śledzionie, albo wydaje się nienormalne, upewnij się, że personel histologiczne pamiętać pozycję nienormalności. tak, że określony obszar jest osadzony prawidłowo, aby zapewnić, że ewentualne część, która zawiera obszar zainteresowania w badaniu mikroskopowym i dalszej analizy.

trzustka jest struktura tłuszczowych pojawia się wydaje, że przylegające do wnęki śledziony. Usuń jak najwięcej masy kolorze jasnobrązowym, najbliżej śledziony (obszar ten zazwyczaj zawiera wiele wysepek) oraz miejsce między dwie gąbki w odpowiednio oznaczonym osadzania kasety przed zamocowaniem w buforowanej formalinie. Dobre płaskie skrawki parafinowe tego organu są trudne do uzyskania, jeżeli nie została ustalona w ten sposób.

nerki należy pociąć po środku, na dwie części, aby odsłonić korę i rdzenia i łukowe tętnic, tak, że podobne obszary będą porównywalne pomiędzy kontroli miotu i zmutowanych zwierząt za pomocą obserwacji mikroskopowej. Osadzanie po obu stronach płaskich powierzchni, w dół, na dno osadczymi kaset, tak, że organ jest stała, zaś płaskie, w związku z czym sekcje lepsze ujawnienie związków morfologiczne

Pamiętaj, aby poprosić o sekcje być wykonane w czasie krótszym niż 3 mikronów, jeśli to możliwe, w celu zapewnienia odpowiedniej analizy kłębuszków. Dodatkowe specjalne plamy mogą być wymagane, a także immunohistochemicznych

Pokarmowego: okrężnicy, jelita krętego Chwyć brzucha koniec przełyku i zacząć wypatroszyć przewodu pokarmowego, aż zostanie osiągnięta odbytnicy. Należy zwrócić uwagę, aby nie rozciągać się tłuszcz krezkowych tak że pozyskiwanie krezkowych węzłów chłonnych może być możliwe po utrwaleniu.

Jelito cienkie należy podzielono na 4-5 części przed ustalenia immersji.

Okrężnicy rozcięto od pozostałej części jelita i jeśli jest to ważne w celu udokumentowania obecność nabłonkowych guzów lub doucment obecność owrzodzenia jelita grubego musi zostać otwarty wzdłuż przeciw krezkowych aspektu i walcowanych. Z końcem śluzówki skierowane na zewnątrz, tak że utrwalający dotrze do wszystkich nabłonek wil możliwe aby na całej długości jelita grubego, z jednej sekcji. Aby to zrobić GUT Roll, wziąć kij wacika zwijać świeżo otwartej okrężnicy na drążku tak, że kompaktowy rolka jest wynik końcowy.

NIE TRY toczyć po płukaniu jelita w PBS, nie będzie trzymać się razem, by zrobić dobre rolki.

Zawsze stosować w ten sam sposób do użycia, koniec pierwszy odbytu zawsze lub jelita cienkiego pierwszy koniec, w środku walca.

Rozwiązać zwinięte jelita na patyku, w probówce 15 ml utrwalaczem i przekazać do osadzania i histologicznej skrawków.

zwinięte jelita

KOŚĆ (Zwykle z kości udowej i kolana) powinna być stała i odwapniano przed zatopieniem i cięcia. Trzy dni zazwyczaj wystarcza do odwapnienia kości myszy.

Jeśli chcesz zrobić immunohistochemicznych skrawków z kości udowych myszy, usunąć kości najpierw w buforowanej formalinie przez dwa dni, a następnie zanurzyć w 5% EDTA przez 3-5 dni do odwapnienie, przed złożeniem do przetwarzania snd zatopieniu w blokach parafinowych

Czaszki może być również czyszczony z kamienia kotłowego i przekroju, aby szukać histopatologicznych zmian w błonie śluzowej nosa, mieć lepszy widok na przysadki, itp Poniższe dwa odczynniki są stosowane rutynowo, aby pomóc w procesie odkamieniania, w proporcji 10 objętościach odczynnik do objętości tkanki:

Cal-Ex -Fisher Cat. Nr CS510-1D w szklanym słoju lub preparatu kubka

Lub Cal-Ex II -Fisher Cat. Nr CS511-1D w szklanym słoju lub preparatu kubka

1. znieczulenia zwierząt, poświęcenie

2. usunąć skórę z biodra w dół, na obu nogach

3. usunąć całą nogę, po obu stronach

4. usunąć jak najwięcej jak to możliwe mięśniowej

5. fix w Cal-Ex II -Fisher Kat. Nie CS511-1D

6. ale nie pozwól im być narażone na to dłużej niż 3 dni

7. Po 3 dniach w Cal-EX II przeniesienia próbki do 70% alkoholu

9. i zorganizować przynieść próbki do laboratorium tutaj

10. tak, że próbki mogą być przetwarzane, wbudowanych. pocięto i zabarwiono pod kątem oglądania

a) Patologia myszy. Ed. Robert R. Maronpot. Cache rzeki Prasa

b) di Fiore’s Atlas Histologii. Victor P. Eroschenko Lee i Febiger

c) histologia. Tekst i Atlas. Ross, Romrell i Kaye. Williams and Wilkins

d) histologia Ludzki. Stevens i Lowe. Mosby. ISBN: 0-7234-2485-3

e) Atlas Histologii. Zhang. Skoczek. ISBN: 0-387-94954-2

f) patologiczne Podstawa choroby. Robbins, Kumar i Collins. Saunders.

g) myszy laboratoryjne. Suckow, Danneman, Brayton. CRC Press

h) Kolor Atlas Anatomii segmentowych myszy. Iwaki, Yamashita, Hayakawa.

Braintree Scientific Inc. ISBN: 4-900659-58-4

k) Manipulowanie zarodek myszy, A Laboratory Manual. Hogan, Beddington, Costantini, Lacy. Cold Spring Harbor Laboratory Press ISBN: 0-87969-384-3

RELATED POSTS

  • K9 University Bed Bug Team – Co …

    Czy Bed Bugs rzeczywistym? Tak Bed Bugs są prawdziwe i są tutaj! Bed Bugs są od wieków, ale aż dziesięć lat temu wszyscy byli jednak odległe myśli w umysłach Amerykanów. Przez ostatnie dziesięć…

  • Mysz z ludzkiej wątroby Nowego modelu …

    z organizacji badawczych Myszy, których własne wątroby komórki zostały zastąpione hepatocytach ludzkich (pokazane na zielono) może być z powodzeniem zakażonych wirusem zapalenia wątroby typu B…

  • Holly Fern – University of Florida …

    Holly paproci, Cyrtomium falcatum Holly paproci, nazwany na spiczastych wskazówki dotyczące jego skórzastych liściach, jest odporna na suszę roślin pochodzi z Afryki i Azji. Ta paproć rozwija…

  • Imac mysz klawiatura, mysz Klawiatura iMac.

    Apple Wireless Mouse and Keyboard Tips and Tricks Niemniej jednak, nie daj się zwieść. Najnowsze gadżety firmy Apple są bardzo fajne produkty i zakup na pewno nie pożałujesz. W przypadku, gdy…

  • Skąd wiesz, że jeśli dziecko ma ospę wietrzną

    Ospa wietrzna jest bardzo niebezpieczne dla osób z problemami z systemem odpornościowym jak białaczka, albo dla osób przyjmujących leki, które osłabiają układ odpornościowy. Jakie są objawy?…

  • Homeopatyczny lek na Tissue …

    Artykuł Narzędzia Toksyny są coraz większa część naszego świata. Rzeczywiście, nie jest bardziej toksyczny ekspozycji we współczesnym świecie niż ludzkie ciało zostało zaprojektowane tak, aby…

Comments are closed.